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警惕細胞培養(yǎng)過程中的『隱形刺客』

更新時間:2023-04-01  |  點擊率:474

毒素(Endotoxin)是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的結(jié)構(gòu),又被稱為脂多糖或者“熱源",是由菌體裂解后釋出的毒素,單位EU/ml。內(nèi)毒素耐熱,曾有人做過實驗,在100℃的高溫下加熱內(nèi)毒素1小時,也不會破壞其結(jié)構(gòu)。

細胞培養(yǎng)中,培養(yǎng)體系中可能會收到內(nèi)毒素的干擾。生物實驗室中,內(nèi)毒素主要來自于各類配試劑所用的水、各類培養(yǎng)基、血清及其他添加劑、實驗器皿表面等。

內(nèi)毒素更像是一個“隱形的刺客",日常實驗中不顯山露水,關(guān)鍵時刻很可能對實驗結(jié)果造成“致命一擊",導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差,影響實驗穩(wěn)定性。


內(nèi)毒素對細胞的的影響

培養(yǎng)體系中的內(nèi)毒素侵染細胞后,會影響細胞的生長繁殖,可能會引起細胞型態(tài)的改變,導(dǎo)致細胞收縮;也可能會引發(fā)細胞應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致信號通路的改變;還有可能影響蛋白的表達調(diào)控。

此前,有人做過實驗,來觀察內(nèi)毒素對細胞培養(yǎng)的影響,記錄的影響包括:刺激白細胞培養(yǎng)物產(chǎn)生組織因子、激活鼠巨噬細胞,以及通過低水平的內(nèi)毒素抑制鼠類紅細胞集落形成等一系列指標。

從現(xiàn)有的研究可以看出,內(nèi)毒素對于細胞培養(yǎng)影響還是很大的:改變細胞外形、活化細胞、產(chǎn)生訊息傳遞物質(zhì)、抑制酶活性、抑制人工受精的成功率等。

血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導(dǎo)致細胞“亞健康",造成數(shù)據(jù)不準,或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導(dǎo)致試驗中斷失敗。所以要盡量選擇內(nèi)毒素低的血清。

Ausbian血清

血清可能會成為細胞培養(yǎng)過程中,內(nèi)毒素的來源,因此,在選擇血清時,要重點關(guān)注內(nèi)毒素指標。


以下幾類情況更應(yīng)關(guān)注內(nèi)毒素的影響:

1、養(yǎng)干細胞時,干細胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。

2、養(yǎng)免疫細胞時,過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。

3、基因敲除相關(guān)的細胞實驗,培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實驗結(jié)果“失之毫厘,謬以千里"。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對實驗至關(guān)重要。

4、原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細胞轉(zhuǎn)染,或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實驗順利的第一步。

5、實驗室有些細胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)?;蜷L時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。


Ausbian進口特級胎牛血清,所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴格質(zhì)控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,對內(nèi)毒素標準及含量有明確的標識,精選內(nèi)毒素≤3EU/ml的批次,降低對細胞的影響。



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